本产品是依据探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

产品特点

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。

2. 引物等组分经过优化，灵敏度高。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. 特异性高，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 可用于定性及定量检测，定量检测时线性范围至少为5个数量级。

6. 本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 本产品仅供科研用途。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

用户可以采用自选的方式提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上绝大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，以下的稀释操作应在独立区域进行，以避免污染样品或试剂盒的其他成分。

1. 标记6个离心管，分别命名为7、6、5、4、3、2。

2. 使用带芯枪头，分别加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，振荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，并放置在冰上。

4. 以此类推，进行进一步的稀释直至获得6个稀释度的标准曲线样品。若不制作标准曲线，则将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，需要准备N+2个qPCR管（包含阴性对照和6个阳性对照），向各PCR管中加入相应成分，具体方法请参见详细说明书。

四、添加模板（模板添加区）

在每个qPCR管中加入2μL模板，依次为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽中，按照说明书规定的程序进行扩增。

六、结果分析

如制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。然后根据待测样品的Ct值，从标准曲线上推算样品DNA浓度的log值。

如未制作标准曲线，结果判定标准如下：阳性对照的Ct值应小于30，且有明显指数增长，呈典型的S型曲线；阴性对照的Ct值应为38或无Ct值，无明显指数和平台期；样本检测结果：Ct值小于35，则结果为阳性；Ct值在35-38范围需复检，若重复结果仍在该范围则判定为阳性。

运输及保存

本产品应在低温下运输，储存温度为-20℃，保存期限为一年。同时阳性对照需单独放置，以避免污染其他试剂。

南宫28生物技术致力于为用户提供高品质的荧光定量PCR试剂盒，以确保科研工作的顺利进行。