南宫28细胞培养条件如下：气相组成为95%空气与5%二氧化碳，培养温度设置为37℃，使用的培养基为MEM加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（P/S）。A-498细胞系是由Aaronson S建立，源自一位52岁肾癌女性患者。

细胞传代建议采用1:2的比例，通常每两天更换培养液。在细胞收到后，建议及时处理，直至其状态良好，再用完全培养液灌满培养瓶并密封，以确保细胞的最佳运输状态。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃和5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以使细胞达到稳定状态。

在显微镜下观察细胞的生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（建议各拍摄40x, 100x, 200x倍率各一张）。前三天的照片是售后服务的重要依据，若不提供照片则默认细胞收到时状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未达到80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基然后放入37℃、5% CO2的孵化器中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放入37℃培养箱进行消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况，如细胞大多数已变圆并开始脱落，迅速将其取回操作台，轻击培养瓶墙后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（即分至两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱进行培养。

b. 悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法，将培养瓶竖放于培养箱静置约1小时，轻轻吸去约3ml培养基，然后补充3ml完全培养基；若培养基颜色变化缓慢，可直接添加500ul左右FBS；传代时可直接加5ml培养基分为两个培养瓶，通常传代3次后可进行离心传代一次，以去除死细胞。

2. 若需分瓶，则将细胞悬液收集于离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后重悬混匀，然后将细胞悬液按1:2比例分至新的T25培养瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基，以保持细胞的生长活力。后续的传代根据实际情况以1:2至1:5的比例进行。

c. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻倒置并显微镜下观察，待细胞收缩变圆后加入5ml的完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml 南宫28的无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后转移至冻存管中；
4. 将冻存细胞立即放入-80℃冰箱，若后期需将细胞转入液氮罐中，建议在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入液氮罐。

d. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴适当防护），快速将其放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无冰晶后，使用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 废弃上清，沉淀重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，并放在37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养；
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基并继续进行培养。

注意事项

需要注意的是，有些细胞的贴壁性较弱，因此在运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如果脱落的细胞较多，可以将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养；对沉淀部分添加1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止消化。之后再进行离心，去掉上清，重悬于1-2ml完全培养基中，最后以1:2的比例进行分瓶传代（分为两个T25培养瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。