南宫28猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书

产品概述

产品名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

包装规格：50T/盒

预期用途

本试剂盒基于实时荧光PCR原理，用于定性检测猪流感病毒，具有重要的指导意义，特别在猪流感病毒引发的流感及其并发症的诊断与疗效评估中。

原理

本试剂盒设计了针对猪流感病毒高度保守区域的特异性引物和探针。当反应体系中含有猪流感病毒基因组模板时，PCR反应便会释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪可实时监测PCR过程中相应通道信号，以实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

序号 | 组成 | 规格
1 | SIV RT-PCR反应液 | 875 μL × 1管
2 | SIV混合酶液 | 125 μL × 1管
3 | SIV阳性对照 | 40 μL × 1管
4 | SIV阴性对照 | 40 μL × 1管
5 | 说明书 | 1份

注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含有猪流感病毒靶基因的质粒。

储存条件及有效期

试剂盒应避光储存在-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

1. 咽喉和鼻拭子采集：

• 咽喉拭子：深入喉头及上颚裂处刮取3至5次，以取咽喉分泌液。
• 鼻拭子：深入鼻腔及周围圈沾取分泌液。
• 将咽喉和鼻拭子放入10 mL生理盐水的离心管中备用。

2. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品并置于离心管中待检。

3. 标本采集管：应包含含有蛋白稳定剂的病毒运输液。

4. 避免标本间交叉污染。

5. 标本处理：尽早检测;若不能立即检测，需在2-8℃条件下冷藏过夜，长期保存应在-80℃以下冻存，避免反复冻融。

检验方法

1. 试剂准备：取出试剂盒中的试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体，计算反应所需试剂量。

2. 样本准备：用QIAGEN或Roche RNA提取试剂盒提取RNA，操作需依照说明书进行。

3. 加样：在PCR反应管中加入样本RNA，并确保终体积25μl/管，然后转移到PCR仪器上。

4. PCR扩增：设置仪器的核酸扩增参数并进行PCR扩增。

结果判定

1. 阳性对照：有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。

2. 阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，曲线为直线或轻微斜线，无指数增长期。

3. 标本结果：根据Ct值评定样本结果为阳性、可疑或阴性。

注意事项

使用南宫28试剂盒的实验室须遵循国家基因扩增检测的管理规范，确保操作过程中不发生RNA降解及交叉污染，且对实验环境和器具进行规范化管理。

以上说明旨在提供有效的使用指导，确保您的检测工作能顺利进行。如需了解更多信息，请访问南宫28官网。